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摘要本研究通過(guò)基因工程技術(shù)，成功在畢赤酵母中表達(dá)了麥芽糖轉(zhuǎn)糖基酶，并對(duì)其活性進(jìn)行了詳細(xì)剖析。實(shí)驗(yàn)采用畢赤酵母GS115作為表達(dá)宿主，構(gòu)建了表達(dá)載體pPIC9K-MalQ，并通過(guò)甲醇誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)。酶活測(cè)定及薄層色譜分析結(jié)果顯示，表達(dá)產(chǎn)物具有顯著的糖基轉(zhuǎn)移酶活性，為工業(yè)化生產(chǎn)大環(huán)糊精提供了新途徑。引言麥芽糖轉(zhuǎn)糖基酶（4-α-葡聚糖轉(zhuǎn)移酶）是一種能夠催化直鏈淀粉環(huán)化生成大環(huán)糊精的關(guān)鍵酶制劑。大環(huán)糊精因其更好的筒狀疏水內(nèi)腔和親水外表結(jié)構(gòu)，在食品、醫(yī)藥及化工等行業(yè)具有廣泛的應(yīng)用前...

摘要：本研究旨在利用畢赤酵母表達(dá)體系高效純化人胰島新生相關(guān)蛋白（INGAP），以探索其在胰島再生和糖尿病治療中的潛在應(yīng)用。通過(guò)構(gòu)建INGAP基因的畢赤酵母轉(zhuǎn)化體系，優(yōu)化表達(dá)條件，并采用親和層析等方法純化目標(biāo)蛋白。結(jié)果顯示，畢赤酵母體系能高效表達(dá)并純化INGAP，為糖尿病治療提供新思路。引言：胰島新生相關(guān)蛋白（IsletNeogenesisAssociatedProtein，INGAP）是一種具有促進(jìn)胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞向胰島分化和再生的蛋白質(zhì)，其在胰島再生和糖尿病治療中展現(xiàn)出巨大...

引言基因轉(zhuǎn)染是指將外源基因通過(guò)特定的方法導(dǎo)入靶細(xì)胞，使其在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)并發(fā)揮功能的過(guò)程。這一技術(shù)自問(wèn)世以來(lái)，為生命科學(xué)研究和醫(yī)學(xué)應(yīng)用帶來(lái)了革命性的變化。在基礎(chǔ)研究方面，基因轉(zhuǎn)染技術(shù)使我們能夠深入研究基因的功能和調(diào)控機(jī)制；在臨床應(yīng)用中，它為治療多種遺傳性和獲得性疾病開(kāi)辟了新的途徑?；驑尫?xì)胞轉(zhuǎn)染，又稱(chēng)為微粒轟擊技術(shù)或生物彈道技術(shù)，是一種利用高壓氣體驅(qū)動(dòng)微小金屬顆粒（如金顆粒或鎢顆粒）攜帶外源基因直接注入細(xì)胞內(nèi)部的轉(zhuǎn)染方法。該方法自1983年由美國(guó)Cornell大學(xué)生物化學(xué)系Jo...

引言小鼠mTSARG3基因作為睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因，其研究對(duì)于深入了解生殖細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制具有重要意義。近年來(lái)，隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展，細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)已成為研究基因功能的重要手段。通過(guò)構(gòu)建基因的真核表達(dá)載體并將其轉(zhuǎn)染到目標(biāo)細(xì)胞系中，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的精確操控，從而進(jìn)一步探究基因在各種生命過(guò)程中的作用機(jī)制。睪丸生精細(xì)胞的凋亡是一個(gè)復(fù)雜且精細(xì)的調(diào)控過(guò)程，涉及多種基因和信號(hào)通路的相互作用。mTSARG3基因作為其中一個(gè)重要的凋亡相關(guān)基因，其功能的深入研究將有助于闡明生殖細(xì)胞凋...

引言CYP2C19是細(xì)胞色素P450酶家族中的重要成員，廣泛參與多種藥物的代謝過(guò)程。其基因多態(tài)性導(dǎo)致個(gè)體間藥物代謝能力的顯著差異，進(jìn)而影響藥物的療效和安全性。因此，構(gòu)建CYP2C19基因載體并建立其轉(zhuǎn)染體系，對(duì)于深入研究CYP2C19基因功能、藥物代謝機(jī)制以及個(gè)體化用藥具有重要意義。本研究旨在通過(guò)分子克隆技術(shù)構(gòu)建CYP2C19基因載體，并利用威尼德電穿孔儀將其轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞中，建立穩(wěn)定的CYP2C19表達(dá)細(xì)胞系。通過(guò)該體系，可以進(jìn)一步研究CYP2C19基因的表達(dá)調(diào)控、...

引言漢灘病毒（Hantavirus）是一種由嚙齒類(lèi)動(dòng)物傳播的病原體，可引起嚴(yán)重的出血熱和腎綜合征。其感染機(jī)制與宿主細(xì)胞表面的特定受體密切相關(guān)，其中腫瘤壞死因子受體Ⅰ（TNFRⅠ）被認(rèn)為是漢灘病毒入侵宿主細(xì)胞的關(guān)鍵受體之一。TNFRⅠ不僅參與病毒的感染過(guò)程，還在宿主免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。因此，構(gòu)建TNFRⅠ的表達(dá)載體并建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系，對(duì)于深入研究漢灘病毒的感染機(jī)制、開(kāi)發(fā)抗病X藥物以及探索宿主免疫應(yīng)答具有重要意義。本研究通過(guò)分子克隆技術(shù)構(gòu)建TNFRⅠ的表達(dá)載體，并利用威尼...

引言腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）是一種重要的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，廣泛參與神經(jīng)元的存活、分化、突觸可塑性以及神經(jīng)再生等過(guò)程。近年來(lái)，隨著干細(xì)胞技術(shù)的快速發(fā)展，人臍帶干細(xì)胞（hUC-MSCs）因其來(lái)源廣泛、免疫原性低、增殖能力強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)，成為細(xì)胞治療和組織工程研究的熱點(diǎn)。將BDNF基因?qū)雋UC-MSCs，不僅可以增強(qiáng)其神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)功能，還能為神經(jīng)退行性疾病的治療提供新的細(xì)胞來(lái)源。構(gòu)建BDNF載體轉(zhuǎn)染hUC-MSCs的轉(zhuǎn)化體系具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。一方面，該體系為研究BDNF在干細(xì)...

引言：基因拷貝數(shù)的測(cè)定在基因功能研究、基因治療及遺傳病診斷等領(lǐng)域具有重要意義。隨著基因編輯技術(shù)的快速發(fā)展，如何準(zhǔn)確、高效地評(píng)估轉(zhuǎn)染細(xì)胞中目標(biāo)基因的拷貝數(shù)成為研究的關(guān)鍵。熒光定量PCR技術(shù)以其高靈敏度、特異性和定量準(zhǔn)確性，在基因拷貝數(shù)檢測(cè)中展現(xiàn)出更好的優(yōu)勢(shì)。在基因轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，構(gòu)建穩(wěn)定、高效的轉(zhuǎn)化體系是實(shí)現(xiàn)基因功能研究的基礎(chǔ)。轉(zhuǎn)染效率的高低直接影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染方法如化學(xué)轉(zhuǎn)染、物理轉(zhuǎn)染等，雖然在一定程度上能夠?qū)崿F(xiàn)基因的導(dǎo)入，但存在轉(zhuǎn)染效率低、細(xì)胞毒性大等...