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在雜交管中進行探針標記以及預雜交和雜交，被許多分子生物學家認為是與Southern,Northern,Dot,SlotorColonyBlots等實驗的*佳方法。雜交管瓶內雜交意味著與傳統(tǒng)系統(tǒng)中進行的實驗相比，使用探針體積會顯著減少，并且探針在膜表面的持續(xù)移動會導致非常有效的雜交反應。在分子雜交儀中，溶液的溫度被精確控制和調節(jié)一般雜交管都采用進口低溶出硼硅酸鹽玻璃制作，堅固耐用，熱穩(wěn)定性優(yōu)良，可用于大部分的標準分子雜交儀，比如威尼德生物科技（北京）有限公司，分子雜交儀VH-1...

1、讓凝膠電泳變得更快,更漂亮方法改進:將電泳電壓進行定時變化,例如可以在開始時將電泳電壓調節(jié)至100V,大約15min,使條帶的確可以因為自身片段大小不同而產生較大差別的泳動速度,從而將片段分離,然而現(xiàn)在的分離或許會間距較小,從而圖片很不漂亮,或者不易觀察.可以緊接著進行120V-130V的電壓進行較小差異電泳,但是由于電泳電壓較大,可以避免過大的片段殘存在膠孔不易泳動的情況.結果:這樣兩個電壓進行配合電泳,便可以得到非常漂亮的電泳條帶,并且可以節(jié)省1/5-2/5左右的時間...

基因克隆是指在體外將含有目的基因或其它有意義的DNA片段同能夠自我復制的載體DNA連接，然后將其轉入宿主細胞或受體生物進行表達或進一步研究的分子操作的過程，因此基因克隆又稱DNA克隆、分子克隆、基因重組或重組DNA技術?；蚩寺∩婕耙幌盗械姆肿由飳W技術，如目的DNA片段的獲得、載體的選擇、各種工具酶的選用、體外重組、導入宿主細胞技術和重組子篩選技術等等。為了方便大家學習和交流，我以問答形式介紹基因克隆及其常見問題，希望對大家有所幫助。Q1：如何獲取一個已知基因的序列？A1：...

1雜交溶液或洗滌溶液在使用前未預熱2探針濃度過高或探針未變性。將雜交液裝入雜交管時，體積減少，探針濃度發(fā)生了變化，應確保相應地調整探針濃度。3未從探針溶液中去除未結合核苷酸。4預雜交和雜交溶液中的預雜交或阻斷劑不足，充分的預雜交對于阻止膜的非特異性雜交非常重要。5雜交或洗脫條件不夠嚴格：6降低鹽濃度。7提高溫度。8增加SDS的濃度。9增加洗脫次數。10膜太干燥，這通?？赡苁敲黠@重疊問題的原因，可能由以下原因引起：11探針體積太小。溶液更換速度太慢，尤其是批量更換處理時分子雜交...

1放射自顯影期間膜對膠片的曝光時間不足。2核酸轉移或結合在尼龍膜上的效率低3目標序列以非常低的拷貝數存在。增加加載到凝膠上的樣品量。4沒有足夠數量的探針序列，增加探針的濃度或加入10%硫酸葡聚糖，這樣減少了溶劑體積，可以到到相同的效果。5沒有探針同源性。6雙鏈DNA探針未變性，或者，探針檢測儀性能下降。在使用RNA探針時發(fā)生可能更大。7探針的比活性太低?？紤]諸如標記反應中的探針濃度、放射性標記的三磷酸鹽的半衰期等因素。8雜交和/或洗滌過程中試驗方法不佳：1）增加鹽的濃度。2）...

常見問題Q1：標記方法有哪幾種？A1：（1）切口平移法（2）隨機引物法（3）末端標記法（4）單鏈DNA探針標記（5）寡核苷酸探針標記法Q2：探針標記物的分類有幾種？A2：（1）探針標記物有放射性核素與非放射性物質兩種。放射性核素標記敏感性高，可檢測pg水平的核酸，但因不易長期保存，且存在放射性污染等問題，現(xiàn)已較少應用。（2）非放射性物質常用的有生物素、地高X等，非放射性探針安全、穩(wěn)定、操作方便并且經濟，但敏感性較低，近年來，由于雜交信號檢測方法的改進，檢測的敏感性得到了很大提...

核酸雜交(Nucleicacidhybridization)，又稱核酸分子雜交。威尼德分子雜交儀原理：是核酸變性和復性理論。雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開形成單鏈，當理化因素消除后，具一定同源性的兩條(探針和待測核苷酸序列)單鏈在適宜的溫度及離子強度條件下，可按堿基互補配對原則特異性地復性形成雙鏈。核酸分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的二條單鏈之間進行。分類：核酸分子雜交按作用環(huán)境不同分為固相核酸分子雜交和液相核酸分子雜交。一、固相核酸分...

硝酸纖維素膜(nitrocellulosefiltermembrane，簡稱NC膜)，NC膜在NorthernBlot、SouthernBlot、WesternBlot中都需要用到，雜交技術有固相雜交和液相雜交之分。固相雜交技術目前較為常用，先將待測核酸結合到一定的固相支持物上，再與液相中的標記探針進行雜交。固相支持物常用硝酸纖維素膜。PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidenefluoride）是蛋白質印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔徑有...